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食品中四種甜味劑的測定方法液相色譜法

 更新時間:2017-03-14 點擊量:3668

食品中四種甜味劑的測定方法液相色譜法

 

范圍

本標準參照DB13/T 1112-2009規(guī)定了食品中乙酞磺胺酸鉀,糖精鈉,環(huán)己基氨基磺酸鈉,阿斯巴甜的測定方法。本標準適用于飲料中乙酞磺胺酸鉀,糖精鈉,環(huán)己基氨基磺酸鈉,阿斯巴甜的測定。本方法乙酞磺胺酸鉀的檢出限為0.05ug/mL;糖精鈉的檢出限為0.05ug/mL;環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢出限為2.0ug/mL;阿斯巴甜的檢出限為0.05ug/mL;

 

規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準,然而,鼓勵根據本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的版本。凡是不注日期的引用文件,其版本適用于本標準。

GB/T6682分析實驗用水規(guī)格和試驗方法

 

原理

樣品中甜味劑在酸性溶液中以陰離子形式,選用含有類離子對試劑(tris)的甲醇水溶液作流動相,采用反相離子對液相色譜法分離,根據色譜峰的保留時間定性,根據峰高或峰面積定量。

 

試劑

除另有規(guī)定,所有試劑均為分析純,為GB/T6682規(guī)定的一級水。

4.1甲醇:色譜純。

4.2稀氨水((1+1):氨水加水等體積混合。

4. 3 Tris儲備液((0. 5mol/L):稱取6.057g三(羥甲基)氨基甲烷溶于超純水中定容到100mL,混合均勻。

4.4乙酞磺胺酸鉀,糖精鈉,環(huán)己基氨基磺酸鈉,阿斯巴甜標準品:純度≥99%。

4.5乙酞磺胺酸鉀,糖精鈉,環(huán)己基氨基磺酸鈉,阿斯巴甜標準儲備溶液:精密秤取乙酞磺胺酸鉀、糖精鈉各0.1000g,用超純水溶解稀釋至10mL;環(huán)己基氨基磺酸鈉1.0000g,用超純水溶解稀釋至10mL;阿斯巴甜0.1000g用1:1甲醇水溶液溶解稀釋至10mL;阿斯巴甜、乙酞磺胺酸鉀、糖精鈉濃度分別為:10.0mg/mL;環(huán)己基氨基磺酸鈉濃度為:100.0mg/mL:于冰箱保存。

4.6混合標準使用溶液:取一定量上述標準儲備液混合,用超純水逐級稀釋,配成乙酞磺胺酸鉀,糖精鈉,阿斯巴甜為1.0mg/mL的混合標準使用液,環(huán)己基氨基磺酸鈉濃度為10.Omg/mL的標準使用液。

4. 7混合標準使用系列溶液:準確吸取混合標準使用液0. 00mL, 0. 05mL, 0. 10mL, 0. 20mL, 0. 40mL, 0. 60mL,環(huán)己基氨基磺酸鈉標準使用液0. 00mL, 0. 10mL, 0. 50mL, 1. 0mL, 2. 0mL, 4. 0mL加超純水定容至10mL,配成標準系列。其中,乙酞磺胺酸鉀、阿斯巴甜、糖精鈉其濃度為0.0ug/mL,5.0ug/mL, 10.0ug/mL, 20.0ug/mL, 40.0ug/mL, 60.0ug/mL,環(huán)己基氨基磺酸鈉濃度0.0mg/mL,0.1mg/mL,0.5mg/mL,1.0mg/mL,2.0mg/mL,4.0mg/mL,置于冰箱冷藏保存。

 

儀器

5.1液相色譜儀(501液相色譜儀),UV-501紫外檢測器。

5.2超聲波清洗器、AP-01無油真空泵。

5.3離心機。

5.4抽濾瓶。

5. 5微孔濾膜:0.45nm。

5.6電子天平:感量0.0001g和0.01 g。

 

分析步驟

6.1樣品處理:

稱取5.0g-10.0g(到0.01g)試樣,用氨水(1+1)調pH至7,加水定容至適當體積,離

心沉淀,上清液經45u m濾膜過濾,濾液作HPLC分析用。

6. 2測定

6.2.1 HPLC參考條件

分析柱:VertexC18色譜柱,4.6mmx250mm粒度5um

流動相:甲醇:5mmol/LTris緩沖溶液(pH4.5)=5: 95。

波長:205nm。

流速:1.2 mL/min。

柱溫:25℃

6.2.2標準曲線:分別進樣阿斯巴甜、乙酞磺胺酸鉀、糖精鈉和環(huán)己基氨基磺酸鈉標準系列溶液各10uL,進行HPLC分析,然后以峰面積為縱坐標,以四種甜味劑的含量為橫坐標,繪制標準曲線。

6.2.3試樣測定:吸取6.1處理后的試樣溶液10uL進行HPLC分析,測定其峰面積,從標準曲線查得測定液中四種甜味劑的含量

 

結果計算

試樣中甜味劑成分的含量按下式計算:

X=cxVxl000/m x 1000

式中:

X-試樣中甜味劑成分的含量,單位為毫克每千克(mg/kg);

c-由標準曲線上查得進樣液中甜味劑成分的量,單位為微克每毫升(ug/mL);

V-試樣稀釋液總體積,單位為毫升(mL);

m-試樣質量,單位為克(g)

計算結果保留兩位有效數字。

 

精密度

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的差值不得超過算術平均值的10%.

1.乙酞磺胺酸鉀(acesulfame-K);

2.阿斯巴甜(aspartame) ;

3.環(huán)己基氨基磺酸鈉(sodiumcyclamate) ;

4.糖精鈉(sodiumsaccharina)

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